Kesimi Yapılan Ruminantlardan Elde Edilen Fasciola Türlerinin Morfometrik ve Moleküler Yöntemlerle İncelenmesi

Abstract

Bu çalışmada, mezbahada kesimi yapılan sığır, koyun ve keçilerin karaciğer safra kanallarından elde edilen erişkin Fasciola türlerinin morfometrik ve moleküler yöntemlerle incelenmesi amaçlandı. Bu amaçla, kesimi yapılan 281 sığır, 529 koyun ve 218 keçi olmak üzere toplam 1028 hayvanın karaciğeri incelendi. Elde edilen 51 Fasciola türlerine ait izolattan 50 erişkin Fasciola örneği kullanıldı. Parazitlerin morfometrik ölçümleri stero mikroskop altında X8 büyütmede yapıldı. Örneklerin tür tayini için gDNA izolasyonu sonrası ITS1 bölgesi PCR ile çoğaltıldı. Çoğaltılan ITS1 bölgesinin kesimi PCR-RFLP yöntemiyle RsaI restriksiyon enzimi kullanılarak yapıldı. İncelenen sığırların 24'ünde (%8.54), koyunların 19'unda (%3.59) ve keçilerin sekizinde (%3.67) olmak üzere 51 hayvanda Fasciola türlerine rastlandı. PCR-RFLP yöntemi ile izolatların 45'inin F. hepatica, beşinin ise ara form Fasciola olduğunu göstermiştir. Vücut uzunluğu/vücut genişliği oranından faydalanılarak elde edilen ölçüm sonuçlarının ROC analizi ile değerlendirilmesi sonucunda, Fasciola hepatica ile ara form Fasciola örneklerinin birbirinden ayrılamadığı saptandı. Fasciola'nın ara formu PCR-RFLP yöntemi ile Türkiye'de ilk defa bu çalışma ile belirlendi. Fasciola türlerin kesin teşhisleri için morfometrik analizin yeterli olmadığı ve PCR-RFLP yöntemi gibi moleküler bir yöntemin kullanılması gerektiği sonucuna varıldı.In this study, it was aimed to examine adult Fasciola species obtained from the liver bile ducts of slaughtered cattle, sheep, and goats at the abattoir using morphometric and molecular methods. For this purpose, the livers of a total of 1,028 animals, including 281 cattle, 529 sheep, and 218 goats, were examined. Fifty adult Fasciola samples were used from the 51 Fasciola species isolates obtained. Morphometric measurements of parasites were performed under a stereo microscope at 8X magnification. For species identification of the samples, the ITS1 region was amplified by PCR following gDNA isolation. The amplified ITS1 region was digested using the RsaI restriction enzyme by the PCR-RFLP method. Fasciola species were detected in 51 animals, including 24 cattle (8.54%), 19 sheep (3.59%), and eight goats (3.67%). PCR-RFLP method showed that 45 of the isolates were Fasciola hepatica and five were intermediate forms of Fasciola. The evaluation of measurement results obtained using the body length-to-body width ratio through ROC analysis revealed that F. hepatica and intermediate Fasciola forms could not be distinguished from each other. The intermediate form of Fasciola was identified for the first time in Turkey through this study by the PCR-RFLP method. It was concluded that morphometric analysis alone is insufficient for the definitive identification of Fasciola species, and that a molecular method such as PCR-RFLP should be used.