Stereological and Immunohistochemical Investigation of Botox Applied Gastrocnemius Muscle in Adult Male Rats

Abstract

Delibaş M, Erişkin Erkek Ratlarda Botox Uygulanan Gastrocnemius Kasının Stereolojik ve İmmunohistokimyasal Olarak İncelenmesi, Van Yüzüncü Yıl Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Anatomi Anabilim Dalı, Veteriner Programı, Yüksek Lisans Tezi, Van, 2022. Bu çalışmada ratlarda musculus gastrocnemius sinistra'ya uygulanan Botox A'nın etkisi doğrultusunda musculus gastrocnemius sinistra'nın 15. ve 21. günlerdeki hacim yoğunluklarını stereolojik yöntem kullanarak belirlemek ve immunohistokimyasal etkilerini ortaya koymak amaçlanmıştır. Materyal olarak 3 aylık olmak üzere 3 farklı grup şeklinde toplam 30 adet erkek Wistar Albino ırkı ratlar kullanıldı. 2 gruba ait olan toplam 20 ratın musculus gastrocnemius sinistra'sına 0.1ml serum fizyolojik içerisinde 2.5U olacak şekilde Botox A çözeltisi hazırlanıp enjeksiyon yoluyla verildi. Tüm işlemler sonunda tüm ratlar % 10'luk tamponlu formaldehitle perfüze edilerek tespit edildi. Daha sonra ratlar diseke edilerek musculus gastrocnemius sinistra'lar açığa çıkarıldı. Çalışmada 3 aylık ratların musculus gastrocnemius sinistra'ları caput laterale ve caput mediale olmak üzere tek parça halinde elde edildi. Kesitler alınırken ilk 15 kesit arasından rastgele bir tanesi seçilerek onu takip eden her 80. kesit sistematik rastgele örnekleme yöntemiyle belirlendi. Böylelikle bir hayvanın musculus gastrocnemius sinistra'sından 5µm kalınlığında ortalama 8-10 kesit alındı. Bu kesitler hematoksilen eozin boyama tekniği ile boyanarak mikroskop altında fotoğraflandı. Cavalieri Prensibi kullanılarak SHTEREOM 1.0 program paketinin noktalı alan cetveli sayesinde total hacimleri belirlendi. Elde edilen sonuçlar SPSS (IBM SPSS for Windows, ver.25) paket programında ANOVA testine tabi tutularak gruplar arası hacim değerlerinin istatistik olarak anlamlı bir farklılık gösterdiği (p<0.05) tespit edildi. Ayrıca musculus gastrocnemius sinistra'ya Botox A'nın 15. ve 21. günlerdeki etkileri Caspase 3 antikor boyası ile immunohistokimyasal olarak tespit edildi. Anahtar Kelimeler: Botox, hacim, immunohistokimya, musculus gastrocnemius, stereoloji.Delibaş M, Stereological and Immunohistochemical Investigation of Botox-Applied Gastrocnemius Muscle in Adult Male Rats, Van Yüzüncü Yıl University, Institute of Health Sciences, Department of Anatomy, Veterinary Program, Master Thesis, Van, 2022. In this study, Botox A applied to the left gastrocnemius muscle in rats. In this study, it was aimed to determine the volume densities of the left gastrocnemius muscle on the 15th and 21st days using stereological method and to reveal their immunohistochemical effects. A total of 30 male Wistar Albino rats, 3 months old, in 3 different groups, were used as material. A Botox A solution of 2.5U in 0.1ml saline was prepared and injected into the left left gastrocnemius muscle of a total of 20 rats belonging to 2 groups. At the end of all procedures, all rats were fixed by perfusing 10% buffered formaldehyde. Then, the rats were dissected and the left gastrocnemius muscles were exposed. In the study, left gastrocnemius muscles of 3-month-old rats were obtained in one piece, caput laterale and caput mediale. While the sections were taken, one of the first 15 sections was randomly selected, and each subsequent 80th section was determined by systematic random sampling method. Thus, 8-10 sections of 5µm thickness were taken from the gastrocnemius muscle of an animal. These sections were stained with hematoxylin-eosin staining technique and photographed under the microscope. Using the Cavalieri Principle, the total volumes of the SHTEREOM 1.0 program package were determined by the dotted area ruler. The results obtained were subjected to the ANOVA test in the SPSS (IBM SPSS for Windows, ver.25) package program and it was determined that the volume values between the groups showed a statistically significant difference (p<0.05). In addition, the effects of Botox A on the left gastrocnemius muscle on the 15th and 21st days were immunohistochemically detected with caspase 3 antibody stain. Keywords: Botox, volume, immunohistochemistry, gastrocnemius muscle, stereology.