Investigations of the Inhibition Kineticts of Some Drugs and Chemicals on Enzyme of Polyphenol Oxidase Purifed From Iğdır Apricot's (Salak)

Abstract

ÖZETIĞDIR KAYISISINDAN (Şalak) SAFLAŞTIRILAN POLİFENOL OKSİDAZ ENZİMİÜZERİNDE BAZI İLAÇ VE KİMYASALLARIN İNHİBİSYON KİNETİĞİNİNARAŞTIRILMASIÇİMEN, ÇilemYüksek Lisans Tezi, Kimya Anabilim DalıTez Danışmanı: Doç. Dr. Halit DEMİRŞubat 2007, 63 sayfaBu çalışmada Iğdır Kayısısı'ndan polifenol oksidaz enzimi (E.C. 1.14.18.1; PPO)afinite kromatografisi yöntemi ile saflaştırılmış ve polifenol oksidaz enzimi üzerine bazı ilaçve kimyasalların inhibisyon kinetiği incelenmiştir. Bu çalışma için Iğdır yöresinden ?şalak?türü kayısı temin edilmiştir. Iğdır kayısısından polifenol oksidaz enzimini saflaştırmak içinpH'sı 7.3 olan fosfat tamponu kullanılarak, gerekli santrifüj ve diğer işlemler yapılarak kolonauygulanacak homojenat hazırlandı. Bu homojenat aktifleşmiş Sepharose 4-B-L-tirozin-p-amnobenzoik asit afinite kolonuna uygulandı. Kolondan alınan fraksiyonlardan aktivitegösterenler, kantitatif protein tayinleri için Coomassie blue yöntemiyle ve 595 nm'de yapıldı.Bunun yanı sıra enzimin optimum pH'sı, optimum sıcaklığı, iyonik şiddet etkisi ve bazı ilaçve kimyasalların inhibisyon kinetiği incelendi. Enzimin optimum pH'sı 6, optimum sıcaklığı30 oC olarak bulundu. Ayrıca iyonik şiddetin etkisi üzerine yapılan çalışmada ise en yüksekaktivite 0.16 M (NH4)2SO4 konsantrasyonunda görülmüştür.Anahtar kelimeler: Afinite kromatografisi, Iğdır Kayısısı, İnhibisyon, Polifenoloksidaz, SaflaştırmaABSTRACTINVESTIGATIONS OF THE INHIBITION KINETICTS OF SOME DRUGSAND CHEMICALS ON ENZYME OF POLYPHENOL OXIDASE PURIFEDFROM IGDIR APRICOT?S (Salak)ÇİMEN, ÇilemMsc Thesis, Chemistry DepartmentSupervisor: Assocate. Prof. Dr. Halit DEMİRFebruary 2007, 63 pagesIn this study, polyphenol oxidase (E.C. 1.14.18.1; PPO) enzyme obtained fromIgdır Apricot?s was purified with affinity chromatography and the inhibition kineticts ofsome drugs and chemicals have been investigated on purified polyphenol oxidase. Theapricot cultivar ? Salak ? was provided from Igdır province. To purify polyphenoloxidase enzyme obtained from apricot, phosphate buffer at 7.3 pH was used, necessarysantrifuging and other processes were carried out and the homogenate will be applied tothe column was prepared. The homogenate was applied to activated Sepharose 4B-Tyrosine-p-amnobenzoic asid affinity column. Activity showing fractions obtained fromcolumn, for quantitative protein analyse was performed at 595 nm with Coomassie bluemethod. In addition, optimum pH of enzyme, optimum temperature, ionic strengtheffect and inhibition kinetics of some drugs and chemicals on enzyme wereinvestigated. Optimum pH of enzyme and optimum temperature was found as 6 and 30oC respectively. Furthermore, the work carried out on the ionic strength the highestactivity was seen in concentration of 0.16 M (NH4)2SO4.Key words: Affinity Chromatography, Igdır Apricot, Inhibition, Polyphenoloxidase, Purificationiii