Yeşil Mikroalg Türü Chlorella Zofingiensis’in N-glikozliasyon Profili

Abstract

Günümüzde, mikroalg türlerinin biyofarmasötik üretiminde hammadde olarak kullanımı konusu tartışılmaktadır. .Bu fik - rin altında yatan temel neden mikro alglerin, biyolojik olarak aktif çok sayıda bileşenin üretimi için karbon dioksiti etkin bir şekilde kullanabilen hücre fabrikaları olmasıdır. Bununla birlikte, mikroalglerden rekombinant protein üretiminde kullanılması için çözülmesi gereken birkaç sorun mevcuttur. Kritik gereksinimlerden birisi salgılanan rekombinant protein - lerden biyo-uyumlu bir N-glikozilasyon profile üretmektir. Mikroalg türlerinin glikozilasyon makineleri ve N-glikan profilleri hakkındaki bilgiler oldukça sınırlıdır. Bu çalışmada, yeşil bir mikroalg türü olan Chlorella zofingiensis ‘in N-glikan profilinin karakterize edilmesi amaçlandı. Bu amaçla (gliko-)proteinleri içeren fotoototrofik olarak yetiştirilmiş Chlorella zofingiensis ekstreleri enzimatik olarak deglikozile edildi ve 2-aminobenzoik asit etiketi ile etiketlendi. Serbest hale getirilen N-glikanlar HILIC bazlı bir yaklaşımla saflaştırıldı ve MALDI-TOF (/TOF)-MS ile analiz edildi. Sonuçlar C. zofingiensis’in oligomannozidik türde N-glikan modellerini içerdiğini göstermiştir. Ek olarak, MALDI-MS tarafından C. zofingiensis’in N-glikosilasyon profilleri, oligomannosidik N-glikanların neredeyse yarısının fosforilenmiş olduğunu ortaya koymuştur.