Investigation of the in Vitro Effect of Some Active Substance That Prevent Hypertension on Angiotensin Converting Enzyme (ace Ec 3.4.15.1) Purified From Bovine Lung by Affinity Chromatography Method

Abstract

Endotel hücreleri tarafından sentez edilen ve kan basıncının düzenlenmesinden sorumlu olan anjiotensin konverting enzim (ACE EC 3.4.15.1), sığır akciğerinden afinite kromatografisi yöntemi ile saflaştırıldı ve sığır akciğeri anjiotensin konverting enziminin saflaştırma oranı 1748 kat olarak hesaplandı. Saflaştırılan ACE için optimum sıcaklık ve pH sırasıyla 35-40 oC ve 7.6 olarak bulundu. SDS-PAGE ile ACE'in 57 kDa, 66 kDa ve 190 kDa molekül ağırlığında üç alt birime sahip olduğu görüldü. Daha sonra jel filtrasyon kromatografisi yöntemi ile enzimin molekül ağırlığı belirlendi ve ACE'in molekül ağırlığı 303 kDa olarak hesaplandı. ACE inhibitörleri lisinopril, kaptopril, fosinopril, beta blokerer atenolol, propranolol, diüretikler triamteren, spironolakton ve indapamidin ACE aktivitesi üzerine etkileri araştırıldı. Ancak spironolakton ve indapamid saf su içinde çözünmediğinden dolayı çalışılamadı. ACE inhibitörleri lisinopril, kaptopril, fosinopril ve diüretik olan triamteren, ACE aktivitesi üzerinde inhibisyon etkisi gösterirken beta blokerleri herhangi bir etki göstermedi. Lisinopril, kaptopril, fosinopril ve triamterenin gibi etken maddeler ACE aktivitesi üzerine yarışmasız inhibisyon gösterdi ve grafikleri çizildi. Grafik denkleminden bu bileşiklerin IC50 değerleri hesaplandı. Sığır akciğeri ACE aktivitesi üzerine inhibisyon etkisi gösteren bu etken maddelerin IC50 değerleri, sırasıyla 4.085 nM, 0.835 nM, 1.159 µM ve 227 µM olarak hesaplandı. Aynı zamanda lisinopril, kaptopril, fosinopril ve triamteren için Ki sabitleri, sırasıyla 6.449 nM, 1.057 nM, 1.675 µM ve 419.5 µM olarak hesaplandı. Kaptopril, 0.835 nM IC50 değeri ile en yüksek inhibitör aktivitesini gösterdi.

Angiotensin converting enzyme (ACE EC 3.4.15.1) synthesized by endothelial cells and responsible for the regulation of blood pressure was purified from the bovine lung by affinity chromatography method and purification rate of angiotensin converting enzyme of bovine lung was calculated as 1748 fold. Optimum temperature and pH for the purified ACE were found to be 35-40 oC and 7.6, respectively. By means of SDS-PAGE was seen to have three subunits at 57 kDa, 66 kDa and 190 kDa molecular weight of ACE. Then, the molecular weight of the enzyme was then determined by gel filtration chromatography and the molecular weight of ACE was calculated as 303 kDa. The effects of ACE inhibitors lisinopril, captopril, fosinopril, βeta-blocker atenolol, propranolol, diuretics triamterene, spironolactone and indapamide on ACE activity were investigated. However, spironolactone and indapamide could not be studied due to dissolution in pure water. While ACE inhibitors lisinopril, captopril, fosinopril and diuretic, triamterene showed an inhibitory effect on ACE activity, B-blockers showed no effect. Active substance such as lisinopril, captopril, fosinopril and triamterenin were noncompetitive effect on ACE activity and graphs were drawn. IC50 values of these compounds were calculated from the graphical equation. IC50 values of these active substances showing inhibition effect on bovine lung ACE activity were calculated as 4.085 nM, 0.835 nM, 1.159 µM and 227 µM, respectively. Ki constants for lisinopril, captopril, fosinopril and triamterene were also calculated as 6.449 nM, 1.057 nM, 1.675 µM and 419.5 µM, respectively. Captopril showed the highest inhibitory activity with an IC50 value of 0.835 nM.