Afinite Kromatografisi Yöntemi ile Koyun Plazmasından Saflaştırılan Anjiotensin Konverting Enzim Aktivitesi Üzerine Askorbik Asidin Etkisinin Araştırılması

Abstract

Anjiotensin konverting enzim (ACE, EC 3.4.15.1) kan basıncının düzenlenmesinde görev alan çok önemli bir enzimdir. Bu çalışmada ACE, koyun plazmasından afinite kromatografisi ile tek basamakta 8281 kat saflaştırıldı. SDS-PAGE ile ACE enziminin molekül ağırlığı 60 kDa ve 70 kDa olmak üzere iki alt birim olarak bulundu. Vmax ve KM ve değerleri sırasıyla 99 (µmol/dk).mL-1 ve 0.5 mM olarak hesaplandı. ACE aktivitesi üzerine askorbik asit (C vitamini) bileşiğinin etkisi incelendi. Askorbik asit ACE aktivitesi üzerine önemli ölçüde inhibitör etkisi gösterdi. Aynı zamanda spesifik bir ACE inhibitörü olan kaptoprilin inhibitör etkisi belirlendi. Askorbik asit ve kaptoprilin IC50 değerleri sırasıyla 0.41 µM ve 1.58 nM olarak hesaplandı. Lineveawer-Burk grafikleri ile bu bileşiklerin Ki değerleri ve inhibitör türleri bulundu. Askorbik asidin inhibitör türü yarışmasız inhibitör ve kaptoprilin inhibitör türü yarışmalı inhibitör olarak belirlendi. Askorbik asit ve kaptopril için Ki değerleri sırasıyla 0.45 µM ve 1.09 nM olarak hesaplandı. Bu çalışmada askorbik asit vitamininin ACE üzerine inhibitör etkisi göstermesi ile hipertansiyon tedavisinde etkili olabileceği sonucuna varıldı.

Angiotensin converting enzyme (ACE, EC 3.4.15.1) is a very important enzyme involved in the regulation of blood pressure. In this study, ACE was purified 8281-fold in a single step by affinity chromatography from sheep plasma. The molecular weights of the ACE by SDS-PAGE were found to be two subunits, 60 kDa and 70 kDa. Vmax and KM and values were 99 (μmol/min).mL-1 and 0.5 mM, respectively. The effect of the ascorbic acid (vitamin C) compound on purified ACE activity was studied. Ascorbic acid showed a significant inhibitor impact on ACE activity. At the same time, the inhibitor impact of captopril, a specific ACE inhibitor, was designated. The IC50 values of ascorbic acid and captopril were calculated as 0.41 μM and 1.58 nM, respectively. Ki values and inhibitor types of these compounds were found by Lineveawer-Burk graphs. The type of inhibitor of ascorbic acid was defined as non-competitive inhibitor and the type of inhibitor of captopril was determined as competitive inhibitor. Ki values for ascorbic acid and captopril were calculated as 0.45 μM and 1.09 nM, respectively. In this study, it was concluded that ascorbic acid vitamin may be effective in the treatment of hypertension with its inhibitory effect on ACE.