Determination of Antioxidant Activities of Helvella Leucomelaena Mushroom Extracts and Investigation of Cytotoxic Effects on Human Hepatocarcinoma Hepg2 Cell

Abstract

Serbest radikaller, proteinlerin, nükleik asitlerin, karbonhidratların ve lipidlerin oksidatif hasarından sorumludur ve kontrolsüz serbest radikal üretimi birçok hastalığa neden olabilir. Bundan dolayı mantarlarda toplam fenolik ve flavonoid madde içeriğinin belirlenmesi, antioksidan aktivitelerini ortaya çıkarılması oldukça önemlidir. Bu çalışmada H. leucomelaena mantarından su ve metanol ekstreleri alınarak antioksidan kapasiteleri tayin edilip kanser hücre hattına uygulandı. Mantar türünün toplam fenolik madde içeriği Folin-Ciocalteu ve flavonoid madde içeriği alimünyum klorür kalorimetrik yöntemiyle teşhis edildi. Ekstrelerin radikal giderme aktivitesi ise DPPH serbest radikalini giderme, ABTS katyon radikalini giderme ve Fe+2 metal iyonlarını bağlama kapasitesi şeklinde kolorimetrik olarak ölçüldü. Ekstrelerin sitotoksik etkilerinin gözlenmesi için HepG2 (karaciğer kanser hücre hattı) kullanıldı. Ekstreler hücre hatları üzerine farklı zaman dilimleri ile uygulanarak etkileri incelendi. Ekstrelerinin hücre hatları üzerine sitotoksik etkileri, Hücre Çoğalması XTT Kiti kullanılarak incelendi. Deneyler sonucunda mantarın toplam fenolik madde içeriği su ekstresinde daha yüksek bulunmasına karşın toplam flavonoid madde içeriği metanol ekstrelerinde daha yüksek bulundu. Bu doğrultuda ABTS radikalini süpürme kapasitesi su ekstrelerinde daha yüksek bulundu. DPPH radikalini giderme kapasitesi ise metanol ekstresinde yüksek bulundu. Su ve metanol ekstrelerinin her ikisinde de ABTS radikalini giderme kapasitesi DPPH radikaline göre yüksek bulundu. Bu mantar türünde en iyi antioksidant yetenek ise Fe+2 metal iyonlarını bağlama kapasitesinde görüldü. XTT testi sonucunda, metanol ekstresinin su ekstresinden daha yüksek oranda HepG2 kanser hücre hatlarına karşı antiproliferatif aktiviteye sahip olduğu görüldü. Yapılan çalışmalar sonucunda bu mantar türünün tıbbi bir mantar olarak kullanılabileceği kanısına varıldı.Free radicals are responsible for the oxidative damage of proteins, nucleic acids, carbohydrates and lipids, and uncontrolled free radical production can cause many diseases. Therefore, it is very important to determine the total phenolic and flavonoid content in mushrooms and to reveal their antioxidant activities. In this study, water and methanol extracts were obtained from H. leucomelaena mushroom. Then, the antioxidant capacities of these extracts were determined and applied to cancer cell lines. The total phenolic content of the mushroom species was determined by the Folin-Ciocalteu and flavonoid content by aluminum chloride calorimetric method. Radical scavenging activity of the extracts was measured colorimetrically as DPPH free radical scavenging, ABTS cation radical scavenging and Fe+2 metal ions binding capacity. HepG2 (liver cancer cell line) was used to observe the cytotoxic effects of the extracts. The effects of the extracts were applied on cell lines at different time periods. Cytotoxic effects of extracts on cell lines were investigated using the Cell Proliferation XTT Kit. As a result of the experiments, although the total phenolic substance content of the mushroom was higher in the water extract, the total flavonoid substance content was found to be higher in the methanol extracts. Accordingly, the ABTS radical scavenging capacity was higher in water extracts. DPPH radical removal capacity was found to be high in methanol extract.Both the water and methanol extracts had higher ABTS racical removal capacity than the DPPH radical. The best antioxidant ability of this mushroom species was seen in its capacity to bind Fe+2 metal ions. As a result of XTT test, it was seen that methanol extract had a higher rate of antiproliferative activity against HepG2 cancer cell lines than water extract. As a result of the studies, it was concluded that this mushroom species can be used as a medicinal mushroom.