Bougainvillea Spectabilis Willd. Bitkisinin Biyolojik Olarak Aktif Rekombinant Bouganin Proteininin Antiviral Ve Antifungal Aktivitesi

Abstract

Bougainvillea spectabilis Willd. bitkisinden ribozom inaktive eden proteinlerden olan Bouganin antiviral protein (BAP) geni izole edilerek klonlanmış, ifade edilmiş, antiviral ve antifungal özellikleri araştırılmıştır. Bouganin proteinini kodlayan genin tamamı bitkinin olgun yapraklarından ekstrakte edilen mRNA’dan Reverse Transkripsiyon-PCR yöntemi ile çoğaltılmıştır. Gen, uçtan uca bölgeyi kapsayacak şekilde tasarlanan spesifik primerler yardımı ile prokaryotik ekspresyon vektörü pETDuet-1’de klonlanmıştır. BAP geninin ifadesi rekombinant plazmitin Escherichia coli (BL21(DE3)pLysS) hücrelerine transferi sonrası isopropyl β-D thiogalactopyranoside (IPTG) ile teşvik edilmiştir. Molekül ağırlığı yaklaşık 28 kDa olan BAP transforme edilmiş bakterilerden izole edilmiştir. BAP ‘ın antiviral aktivitesi Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) kullanılarak mekanik inokulasyon yöntemi ile araştırılmıştır. Antifungal aktivitenin belirlenmesi disk difüzyon metodu yardımıyla patojen ve patojen olmayan Rhizoctonia solani, Trichoderma harzianum ve Fusarium oxysporum fungusları ile araştırılmıştır. BAP uygulama miktarı arttıkça ZYMV’nin neden olduğu hastalık şiddetinin azaldığı tespit edilmiştir. BAP 72 saatlik kontrol uygulaması ile karşılaştırıldığında, Rhizoctonia solani’nin gelişimini % 30.7, Trichoderma harzianum’unun gelişimini ise % 20 oranında inhibe etmiştir. Fusarium oxysporum’un gelişiminde herhangi bir inhibisyon etkisi gözlenmemiştir. In vitro’da ifade edilen BAP proteininin uygulandığı tüm bitkiler (sadece BAP protieni uygulanan kontrol grubu da dahil) uygulama yapılmayan bitkilere oranla şiddetli gelişme geriliği sergilemiştir.