Purification and Characterization of Glutathione Reductase From Van Lake Fish (Chalcalburnus Tarichi, P-1811) and Investigation of Effects of Some Drugs and Chemicals on This Enzyme

Abstract

Glutatyon redüktaz, (Glutatyon: NADP+ oksidoredüktaz, EC 1.8.1.7, GR) enzimi, Van Gölü balığının (Chalcalburnus tarichi, P-1811) karaciğerinden ve eritrositlerinden saflaştırıldı. Saflaştırma homojenat ve hemolizat hazırlanmasının ardından afinite kromatografisi yöntemiyle yapıldı. Karaciğer ve eritrosit GR enzimlerinin saflaştırılması sırasıyla 4552 ve 7619 kat olarak gerçekleştirildi. Karaciğer ve eritrosit GR enzimleri için optimum sıcaklık, pH ve iyonik şiddet etkisi araştırıldı. Bu değerler karaciğer ve eritrosit GR için sırasıyla 40 ve 60 °C; 8.0, 8.0 ve 50 mM, 50 mM olarak bulundu. SDS-PAGE ile enzimlerin alt birimlerinin molekül ağırlıkları 55 kDa olarak hesaplandı. Ayrıca Van Gölü balığı karaciğer ve eritrosit GR enzim aktiviteleri için amikasin, sefazolin, ivermektin ve kanamisin ilaçlarının etkileri incelendi. Yarışmasız inhibisyon etkisi gösteren bu ilaçlar için Ki sabitleri ve I50 değerleri hesaplandı. Van Gölü Balığı karaciğer GR enzimi için I50 değerleri sırayla 1.63x10-2, 3.66x10-2, 5.04x10-4, 1.88x10-2 M ve eritrosit GR enzimi için I50 değerleri sırayla 2x10-2, 3.04x10-2, 7.87x10-4, 3.18x10-2 M olarak hesaplandı. Ki sabitleri de balık karaciğer GR enzimi için sırayla 1.39x10-2 M, 1.84x10-2 M, 6.54x10-4 M, 1.12x10-2 M; eritrosit GR enzimi için de sırayla 2.32 x10-2 M, 4.64 x10-2 M, 1.19 x10-3 M, 3.64 x10-2 M olarak hesaplandı.Glutathione reductase (Glutathione: NADP+ oxidoreductase, EC 1.8.1.7, GR) was purified from Lake Van fish (Chalcalburnus tarichi, P-1811) liver and erythrocytes. The purification was performed by preparation of homogenate and hemolysate and affinity chromatography. Purification of fish liver and erythrocytes GR enzymes were obtained as 4552 and 7619 fold, respectively. Optimal temparature, optimal pH and ionic strenght were determined each enzyme as 40 °C, 60 °C; 8.0, 8.0; 50 mM, 50 mM respectively. Subunit molecular weight of the each enzymes were estimated as 55 kDa by SDS-PAGE. In addition, effects of amicasin, cefazolin, ivermectine and kanamycin were investigated on Van Lake fish liver and erythrocyte GR enzyme activity. I50 values and Ki constants were calculated for amicasin, cefazolin, ivermectine and kanamycin showing noncompetitive inhibition effects. I50 values were calculated as 1.63x10-2, 3.66x10-2, 5.04x10-4, 1.88x10-2 M for liver GR and 2x10-2, 3.04x10-2, 7.87x10-4, 3.18x10-2 M for erythrocyte GR respectively. Ki constants were found as 1.39x10-2 M, 1.84x10-2 M, 6.54x10-4 M, 1.12x10-2 M for liver GR and 2.32 x10-2 M, 4.64 x10-2 M, 1.19 x10-3 M, 3.64 x10-2 M for erythrocyte GR respectively.