Noncoding Regions of the Mitochondrial Species Lead To Hypodermasise on Cattle and Cytochrome Oxidase I Gene Sequences of PCR-RFLP Technique by the Molecular Characterization

Abstract

Hypodermosise sebep olan türler Hypoderma bovis ve Hypoderma lineatum'dur. Mevsimsel olarak sonbahar, kış hatta ilkbahar döneminde görülen ve enfeste hayvanların dorsal ve lumbal bölgelerinde derialtı şişlikleriyle karakterize olan paraziter bir hastalıktır. Hypoderma türlerinin morfolojik teşhis yöntemleri literatürlerde sınırlı kalması, tanısının güç olması ve gelişen dünyamızda farklı teşhis yöntemlerinin ortaya çıkışı nedeniyle moleküler tekniklere gerek duyulmuştur. Bu çalışmada, Hypoderma türleri Van Belediye Mezbahasından kesim sonrası sığırların derialtı dokularından elde edildi ve Hypoderma larvaları için örneklenen PCR ürünleri COI (mt DNA) geni ve mt DNA kodsuz bölge başarıyla sekanslandı. Genomik DNA'lar ekstraksiyon kit kullanılarak elde edildi, agaroz jelde COI geni için 688bç'lik, mitokondrial noncoding bölgelede ? 1250-1320bç'lik ve nd1 geni için ? 321-1249bç'lik DNA ürünü veren mitokondrial DNA geninin polimeraz zincir reaksiyonuyla (PCR) amplifikasyonu sağlandı. PCR amplifikasyonu ve HinfI, RsaI ve TaqI restriksiyon enzimleri kullanılarak RFLP tekniği ile mitokondrial DNA gen bölgesi analiz edildi. Bu, Van şehrinde, Hypoderna türlerinin tanımlandığı ilk moleküler çalışmadır.

The species, Hypoderma bovis and Hypoderma lineatum lead to Hypodermosise on cattle. Seasonally, it is seen in autumn, winter and even in spring and in the dorsal and lumbar regions of the infested animals is a parasitic disease which is characterized by subcutaneous protuberance. In the literature, morphological diagnostic methods of Hypoderma parts remain limited, its diagnosis is difficult and in the developing world doe to the emergence of different diagnostic methods, there is a need to molecular techniques. In this study, the types of Hypoderma were obtained from Van Local Slaughter House after the cutting of cattle subcutaneous of tissues and larvae of Hypoderma sampled for PCR products COI (mt DNA) gene and mt DNA noncoding region were successfully sequenced. DNAs were obtained using the extraction kit and Polymerase chain reaction (PCR) foe amplification of the mitochondrial DNA gene yielded for 688bp COI gene for ? 321-1249bp nd1 and ? 1250-1320bp mtDNA noncoding region on agarose gel. Using the PCR amplification and HinfI, RsAI and TaqI restriction enzymes, mitochondrial DNA gene regions were analyzed with the RFLP technique. This is the first molecular study of the Hypoderma types defined in Van