Donmuş Çözünmüş Kanın Farklı Değerlerde Santrifüjünün Dna İzolasyonu Üzerine Etkileri

Abstract

Kandan DNA izolasyonu, nDNA ve mtDNA’yı elde etmek için yaygın kullanılan bir uygulamadır. Donmuş çözünmüş kanın (DÇK) santrifüjü sonrası elde edilen çökeltiden DNA izolasyonun gerçekleştirilebileceği daha önce gösterilmişti ve bu ön uygulama DNA izolasyonu üzerine olumlu sonuçlara sahipti. Fakat, bu ön uygulama için hangi santrifüj değerlerinin kullanılabileceği ve bunların etkileri bilinmemektedir. Bu çalışmanın amacı belirtilen ön uygulama için uygun santrifüj değerlerini belirlemek ve bu santrifüj değerlerinin izole edilen DNA üzerine ektilerini göstermekti. Bu amaçla, DÇK’nin farklı değerlerde santrifüjüyle elde edilen çökelti ve süpernatantdan DNA izolasyonları gerçekleştirildi. Sonra, izole edilen DNA örneklerinden spektrofotometrik, jel elektroforezi ve gerçek-zamanlı PCR analizleri gerçekleştirildi. Sonuç olarak, DÇK’nin, 5.000×g’de 2 dakika ya da üzeri değerde santrifüjü genetik materyali tamamen çöktürmeyi sağladı. Bu durum ayrıca yüksek miktarda DNA elde edilmesine imkan sağladı. Belirtilen santrifüj seviyelerinde elde edilen çökeltiden izole edilen DNA örneklerinde mtDNA/nDNA oranı değişmedi fakat, DNA bütünlüğü azaldı. Sonuç olarak, DÇK’nin 5.000×g’de 2 dakika ya da üzerinde santrifüjü, DNA izolasyonundan önce DÇK’de bulunan genetik materyali çöktürmek ve yıkamak için kullanılabilir.