Investigation of in Vitro Effect of Alkanna Tinctoria Root Organic Phase Extracts on 6-Phosphoglukonate Dehydrogenose, Glucose-6-Phosphate Dehydrogenose and Glutathione Reductase Enzymes

Abstract

Bu çalışmada Alkanna tinctoria bitki kökü organik faz ekstraktlarının insan eritrositlerinde bulunan glutatyon redüktaz, 6-fosfoglukonat dehidrogenaz ve glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enzimlerinin aktiviteleri üzerindeki etkileri araştırıldı. Enzim aktivitesi Beutler metoduna göre spektrofotometrik yöntem kullanılarak ölçüldü. Her enzim için Lineweaver-Burk grafiği çizildi. Bunun için 3 farklı substrat konsantrasyonunda 5 farklı inhibitör (organik faz bitki ekstraktı) konsantrasyonu çalışıldı. Kontrol grubu da oluşturularak grafiğe geçirildi. Bu işlem her bir enzim için ayrı ayrı uygulandı. Grafikten inhibisyon gösterenlerin inhibisyon türü ve I50 değerleri bulundu. Organik faz bitki ekstraktlarının konsantrasyon 0,0053 mg/ml-0,021 mg/ml aralığında, 6-fosfoglukonat dehidrogenaz enziminin substratı olan 6-fosfoglukonatın konsantrasyonu 0,15-0,6 mM arasında, glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enziminin substratı olan glukoz-6-fosfatın konsantrasyonu 0,36-0,72 mM arasında ve glutatyon redüktaz enziminin substratı olan okside glutatyonun konsantrasyonu 0,2-1 mM arasında seçilmiştir. Bu konsantrasyonlar en uygun olacak şekilde ön ölçüm işlemleri ile belirlenmiştir. Alkanna tinctoria bitki kökünün organiz faz ekstraktı, 6-fosfoglukonat dehidrogenaz ve glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enzimlerini aktive ederken glutatyon redüktaz enzimini inhibe etti. Bitki ekstraktları glutatyon redüktaz enziminin aktivitesi üzerine yarışmasız inhibisyon etkisi gösterdi ve inhibisyonun I50 değeri 0,0249 mg/ml olarak hesaplandı.

In this study, The effect of Alkanna tinctoria root organic phase extracts on human erytrocyte 6-phosphogluconate dehydrogenose, glucose-6-phosphate dehydrogenose and glutathione reductase enzymes was investigated. Enzyme activity was measured using spectrophotometer method according to Beutler method. Lineweaver-burk graph was drawn for each enzymes. For this purpose, at three different substrates and five different inhibitors (organic phase of plant) concentrations was studied. Also control group graphs were constucted. This process was performed for each enzyme. İnhibition type and I50 values were found from inhibition graphs. Organic phase extract concentrations of plant, 6-phosphogluconate concentrations being the substrate of 6-phosphogluconate dehydrogenose, glucose-6-phosphate concentrations being the substrate of glucose-6-phosphate dehydrogenose, and oxidized glutathione concentrations being the substrate of glutathione reductase were selected among 0,0053-0,021 mg/ml, 0,15-0,6 mM, 0,36-0,72 mM, and 0,2-1 mM respectively. These concentrations were determined as the most suitable volues by means of the first procedures. Organic phase extracts of Alkanna tinctoria root inhibited glutathione reductase while they activated 6-phosphoglukonate dehydrogenose and glucose-6-phosphate dehydrogenose. The plant extracts shown noncompetitive inhibition effect on glutathione reductase enzyme activite and the I50 value was calculated as 0.0249 mg/ml.