Determination of Antimicrobial Susceptibility of Some Contagious and Environmental Pathogens Isolated From Bovine Milk To Selected Antibiotics Agent With Agar Disc Diffusion and Agar Dilution Tests in Van Region

Abstract

Bu araştırmada, sığır sütlerinden izole edilen 30 Staphylococcus aureus, 33 Enterococcus spp., 15 Streptococcus uberis, 9 Streptococcus agalactiae ve 3 Streptococcus dysgalactiae subsp. dysgalactiae olmak üzere toplam 90 Gram-pozitif kok bakteri izolatının çeşitli antimikrobiyal maddelere karşı in vitro duyarlılıkları disk difüzyon ve agar dilüsyon yöntemleri ile incelendi. İncelenen suşların %90'nında üremeyi önleyen (MİK90) konsantrasyonları, Staphylococcus aureus suşlarında penisilin, ampisilin, eritromisin, tetrasiklin, oksasilin, amoksisilin+klavulanik asit, sefotaksim, sefuroksim, sefalotin, penisilin+novobiosin, enrofloksasin ve novobiosin için sırası ile 2.0, 4.0, 0.25, 32, 0.5, 2.0/1.0, 4.0, 1.0, 0.5, 0.25/0.5, 0.25 ve 0.25 µg/ml; Enterococcus spp. suşlarında 8.0, 1.0, 4.0, 1.0, 64, 2.0/1.0, 128, 256, 128, 4.0/8.0, 32 ve 4.0 µg/ml; Streptococcus uberis suşlarında 0.06, 0.03, 0.12, 1.0, 2.0, 0.03/0.015, 1.0, 0.5, 1.0, 0.25/0.5, 2.0 ve 8.0 µg/ml; Streptococcus agalactiae suşlarında ise 0.015, 0.06, 0.03, 64, 0.5, 0.06/0.03, 0.06, 0.06, 0.25, 0.12/0.25, 2.0 ve 2.0 µg/ml olarak belirlendi. İncelenen Staphylococcus aureus suşlarının 13 (%43.3)'ü penisilin G ve ampisiline, 10 (%33.3)'u da tetrasikline karşı her iki yöntemle dirençli bulundu. Enterococcus spp. suşlarının 1 (%3)'i eritromisin, 3 (%9.1)'ü de tetrasikline her iki yöntemle dirençli bulunurken, disk difüzyon yöntemi ile penisilin G'ye dirençli bulunan 2 Enterococcus spp. suşunun agar dilüsyon yöntemiyle duyarlı olarak tespit edildi. Bakteri izolatlarının CLSI verilerine göre duyarlı veya dirençli olarak tespitinde disk difüzyon ve agar dilüsyon yöntemleri arasındaki fark istatistiksel olarak önemsiz bulundu. Streptococcus uberis suşlarının 1 (%6.7)'i eritromisine ve tetrasikline karşı her iki yöntemle dirençli bulundu. Streptoccoccus agalactiae ve Streptococcus dysgalactiae suşlarının tamamı tetrasikline, Streptococcus agalactiae suşlarından 1 (%11.1)'i de, penisilin, ampisilin, eritromisin ve sefotaksime her iki yöntem ile dirençli bulundu. Disk difüzyon yöntemi ile incelenen bakteri suşların tamamı da vankomisine, Staphylococcus aureus suşlarının tamamı da metisiline duyarlı bulundu. Araştırmada penisiline dirençli bulunan Staphylococcus aureus ve Streptococcus spp. suşları agar dilüsyon yöntemi ile penisilin+novobiosin kombinasyonuna duyarlı, penisiline duyarlı 4 Enterococus spp. suşu ise penisilin+novobiosin kombinasyonuna dirençli bulundu. Sonuç olarak, mastitis sağaltımında kullanılan ve CLSI verilerine göre değerlendirilemeyen antimikrobiyal maddeler için değerlendirme kriterlerinin belirlenmesinin gerekli olduğu ve mastitis patojenlerine yönelik tespit edilen MİK değerlerinin de, özellikle ülkemizde bu konuda yapılacak çalışmalar yanında veteriner klinik laboratuvar standartlarının oluşturulmasına yönelik yapılacak çalışmalara katkısı olacağı kanısına varıldı.

In this study, a total of 90 strains including 30 Staphylococcus aureus, 33 Enterococcus spp., 15 Streptococcus uberis, 9 Streptococcus agalactiae ve 3 Streptococcus dysgalactiae subsp. dysgalactiae isolated from bovine milk were tested for their susceptibility to several antimicrobial agents by using agar disk diffusion and agar dilution methods. The concentration (microgram per mililitre) that inhibits % 90 (MIC90) of the tested isolates for Staphylococcus aureus were found to be 2.0, 4.0, 0.25, 32, 0.5, 2.0/1.0, 4.0, 1.0, 0.5, 0.25/0.5, 0.25 and 0.25 to penicillin, ampicillin, erythromycin, tetracycline, oxacillin, amoxacillin+clavulonic acid, cefotaxime, cefuroxime, cephalotin, penicilin+novobiocin, enrofloxacin and novobiocin respectively. MIC90 values for Enterococcus spp. strains were 8.0, 1.0, 4.0, 1.0, 64, 2.0/1.0, 128, 256, 128, 4.0/8.0, 32 and 4.0 whereas MIC90 were 0.06, 0.03, 0.12, 1.0, 2.0, 0.03/0.015, 1.0, 0.5, 1.0, 0.25/0.5, 2.0 and 8.0 for Streptococcus uberis strains respectively. MIC90 values for Streptococcus agalactiae strains were determined as 0.015, 0.06, 0.03, 64, 0.5, 0.06/0.03, 0.06, 0.06, 0.25, 0.12/0.25, 2.0 and 2.0 respectively. Thirtheen (%43.3) strains of Staphylococcus aureus were found to be resistant to penicillin and ampicillin by both methods, whereas 10 (%33.3) of them were resistant to tetracycline. One (%3) of the Enterococcus spp. strains was resistant to erithromycin and three strains (%9.1) were resistant to tetracycline by both methods, whereas two strains found to be resistant to penicilin G were susceptible by agar dilution method. Significant statistical differences were not found between the results obtained by disk difusion and agar dilution methods to arrange the bacterial isolates as susceptible or resistant according to the Institut of CLSI. One (%6.7) of the Streptococcus uberis strains was resistant to erithromycin and tetracycline by both tmethods. All strains of Streptoccoccus agalactiae and Streptococcus dysgalactiae were resistant to tetracycline, whereas one (%11.1) strain of Streptococcus agalactiae were also resistant to penicilin, ampicillin, erythromycin and cephotaxime by both methods. All strains tested were susceptible to vancomycin and all Staphylococcus aureus strains were susceptible to methicillin by disk difusion. Penicillin resistant Staphylococcus aureus and Streptococcus spp. strains were found to be sussceptible to penicillin+novobiocin combination by agar dilution method, however, four Enterococcus spp. strains found to be susceptible to penicillin were resistant to penicilin+novobiocin combination. The results of this study suggested that interpretive criteria should be determined for antimicrobial agents which has no interpretive criteria according to CLSI. Additionally, MIC values for several antimicrobial agents reported in this study would be helpful for the investigations related to antimicrobial susceptibility of mastitis patojens in our country and to establish veterinary clinical laboratory standarts.