Morphological and Molecular Identification of Sarcocystis Species in Sheep in Van Province

Abstract

ÖZET Yiğit M, Van İlinde Koyunlarda Sarcocystis Türlerinin Morfolojik ve Moleküler Olarak Tanımlanması, Y.Y.Ü. Sağlık Bilimleri Enstitüsü Parazitoloji Anabilim Dalı Yüksek Lisans Tezi, Van, 2024. Çoğu Sarcocystis türünün zorunlu iki konaklı yaşam döngüsü vardır; karnivorlar son konakçı, ruminantlar ise ara konakçıdır. Koyunlarda tanımlanmış yalnızca dört onaylanmış tür bulunmaktadır. Bunlar, kedigiller tarafından aktarılan patojenik olmayan makroskopik S. gigantea ve S. medusiformis ile köpekgiller tarafından aktarılan patojenik mikroskobik S. tenella ve S. arieticanis'tir. Yapılan bu çalışmayla koyunlarda bulunan Sarcosystis türlerinin teşhisini sağlamak için PCR-RFLP yöntemi ile parazit türlerinin genomik yapılarının ortaya çıkarılması ve özellikle 18S rDNA genini kullanılarak tür teşhisinin yapılması amaçlanmıştır. Bu çalışma kapsamında Van ililnde kesimi yapılan 100 koyunun özefagusları materyal olarak kullanılmış, moleküler analizlerinin gerçekleştirilmesinde ise PCR analizleriyle birleştirilmiş pepsin sindirim yöntemi kullanılmıştır. Sonuçta, yapılan bu çalışmada PCR analizleriyle birleştirilmiş pepsin sindirim yönteminin diğer PCR metotlarına göre daha duyarlı olduğu, S. gigantea'nın unik ribozomal RNA gen dizilerine sahip olduğu tespit edilmiştir. Ayrıca, genomik DNA'lar ekstraksiyon kit kullanılarak elde edildi, agaroz jelde 975 bp'lik DNA ürünü veren ribozomal RNA geninin polimeraz zincir reaksiyon (PCR)'la amplifikasyonu sağlandı. PCR amplifikasyonu ve MspI and MboII restriksiyon enzimleri kullanılarak RFLP tekniği ile ribozomal RNA gen bölgesi belirlenmiştir. Ayrıca bu çalışma Van'da, S. gigantea izolatlarının tanımlandığı ilk moleküler çalışma niteliğindedir.

Yiğit M, The Morphological and Molecular Idenfication Of Sarcosystis Species from Sheeps in The Province Van, Y.Y.Ü. Health Institute, Department of Parasitology, Master Thesis, Van, 2024. Most Sarcocystis species have an obligate two-host life cycle; Carnivores are the final hosts and ruminants are the intermediate hosts. There are only four confirmed species identified in sheep. These are the nonpathogenic macroscopic S. gigantea and S. medusiformis, transmitted by felines, and the pathogenic microscopic S. tenella and S. arieticanis, transmitted by canids. The aim of this study was to reveal the genomic structures of parasite species using the PCR-RFLP method and to identify the species, especially by using the 18S rDNA gene, in order to identify Sarcosystis species found in sheep. Within the scope of this study, the esophagus of 100 sheep slaughtered in Van province was used as material, and the pepsin digestion method combined with PCR analyzes was used to perform molecular analyses. The present study concluded that the ribosomal RNA gene sequences of S. gigantea were distinct, and that the pepsin digestion method in conjunction with PCR analyses was more sensitive than alternative PCR methods. In addition, genomic DNAs were obtained using an extraction kit, and the ribosomal RNA gene, which yielded a 975 bp DNA product in agarose gel, was amplified by polymerase chain reaction (PCR). The ribosomal RNA gene region was determined by RFLP technique using PCR amplification and MspI and MboII restriction enzymes. Furthermore, this is first molecular study that identifies S. gigantea isolates in Van.