The Effect of on the Activity of Cellulase Enzyme Produced by Bacillus Flexus T1 Isolate Isolated and Characterized From Canik Saltern (van)

Abstract

Bu araştırmada; Canik Tuzlası'ndan izole edilen, halofilik bakterilerin, selülaz enzimi yönünden, taranması hedeflendi. Ayrıca, farklı ortam bileşenlerinin enzim aktivitesine üzerine etkisinin belirlenmesi amaçlandı. İlave olarak, selülaz enzimi yönünden pozitif izolatların, klasik ve moleküler karakterizasyonu gerçekleştirildi. Halofilik bakterilerin izolasyonunda % 20 oranında NaCl içeren halofilik besiyeri kullanıldı. İzolatların selülaz enzimi yönünden taranmasında, % 1 oranında karboksimetil selüloz (CMC) içeren, halofilik agar, kullanıldı. Bu besiyerine izolatlar yoğun bir şekilde ekildi ve 35°C'de 48 saat inkübasyona bırakıldı. İnkübasyondan sonra, plakların yüzeyini kapatacak şekilde, kongo kırmızısı boyası ilave edilerek ve 15 dakika sonra 1M'lık NaCl çözeltisi ile yıkandı. Biyomasın etrafında şeffaf zon oluşumu, selülaz enzimi yönünden pozitif olarak değerlendirildi. Koloni morfolojisine göre, farklılık gösteren üç izolattan, sadece bir tanesi selülaz enzimi yönünden, pozitif bulundu. Bu izolatın farklı sıcaklık aralıkları, farklı pH ve farklı tuz konsantrasyonlarında gösterdiği aktivite belirlendi. Ayrıca farklı karbon kaynaklarının, organik ve inoganik azot kaynakları ile farklı amino asitlerin enzim aktivitesi üzerine etkisi belirlendi. Bu izolat tarafından üretilen, selülaz enziminin, 48 saatlik sabit inkübasyon aralığında sırasıyla; 25ºC'de (48,79 IU/ml), pH 8 (39,78 IU/ml) değerinde, %5 NaCl (36,07 IU/ml), fruktoz (37,04 IU/ml), pepton (37,04 IU/ml), ve ornitin (36,98 IU/ml) amino asiti'nin varlığında yüksek (aktivite gösterdiği tespit edildi. Ayrıca, bu izolatın morfolojik, fizyolojik ve biyokimyasal özellikleri belirlendi. İlave olarak, selülaz pozitif izolatın, 16S rRNA diziliş analizine göre Bacillus flexus suşuna mensup olduğu tespit edilerek, bakteriyel taksonomideki durumunu belirlendi.

In this study; It was aimed to screen the halophilic bacteria isolated from Canik Saltern for cellulase enzyme. It was also aimed to determine the effect of different media components on enzyme activity. In addition, classical and molecular characterization of the cellulase-positive isolates was performed. Halophilic medium containing 20 % NaCl was used for isolation of halophilic bacteria. For the detection of cellulase enzyme, halophilic agar containing 1% carboxymethyl cellulose (CMC) was used. The isolates were intensively planted on this medium and allowed to incubate at 35 ° C for 48 hours. After incubation, they were washed with 1M NaCl solution after 15 minutes by adding kongo red dye to cover the surface of the plates. The formation of clear zones around the biomass was evaluated as positive for cellulase enzyme. According to colony morphology, only one of the three isolates was found positive for cellulase enzyme. The activity of this isolate at different temperature ranges, different pH and different salt concentrations were determined. In addition, the effects of different carbon sources, organic and inoganic nitrogen sources and different amino acids on enzyme activity were determined. The cellulase produced by this isolate, respectively, at a fixed incubation interval of 48 hours; At 25ºC (48,79 IU/ml) pH 8 (39,78 IU/ml), 5% NaCl (36,07 IU/ml), fructose (37,04 IU/ml), peptone (37,04 IU/ml) and ornithine (36,98 IU/ml) showed high activity in the presence of amino acid. In addition, morphological, physiological and biochemical properties of this isolate were determined. In addition, it was determined that the cellulase positive isolate belonged to Bacillus flexus strain according to 16S rRNA sequencing analysis and its status was determined in bacterial taxonomy.