Investigation of Apoptotic and Oxidative Mechanisms in Liver and Kidney Tissues of Sheep With Fluorosis

Abstract

Bu tez çalışması, kronik olarak flora maruz kalan koyunlarda en çok etkilenen dokular olan böbrek ve karaciğerde oluşan hasarın, moleküler temeli ve nedenlerini apoptotik ve oksidatif yolaklar üzerinden belirlemek amacıyla planlandı. Bu amaçla, endemik florozis gözlenen Van ili Çaldıran İlçesine bağlı köylerde kesime gönderilmiş 4-6 yaş aralığında, klinik olarak florozis tanısı konulan koyunlardan karaciğer ve böbrek dokuları alındı. Kontrol grubu ise özel bir et kesim yerinden, florozis gözlenmeyen köylerden gelen klinik olarak sağlıklı koyunlardan oluşturuldu. Hedef genlerin apoptotik ve oksidatif gen ekspresyonları gerçek zamanlı-PZR yöntemi ile belirlendi. Apoptotik genlerin 2-ΔCtsonuçlarının göre, karaciğer dokusundaki, kaspaz 3 ve Bak değerlerinin florozis grubunda azaldığı (p≤0.05), kaspaz-9 değerlerinin ise arttığı (p≤0.05), böbrek dokusunda ise kaspaz 3 değerlerinde florozisli grupta önemli bir artış olduğu, kaspaz 9 ve Bak dışındaki bütün genlerin ise istatistiksel olarak önemli oranda azaldığı tespit edildi. Kontrol genine göre (GAPDH) ise; karaciğerde apoptotik genlerden kaspaz-8, kaspaz-9 ve Bim arttığı, kaspaz-3, Bcl-2, Bak azaldığı, böbrekte ise kaspaz-3, ve Bax'ta artış, kaspaz-8, Bcl-2, Bcl2l-1, Bim ve Bak'ta ise azalma gösterdiği tespit edildi.Oksidatif stres genlerinin 2-ΔCtdeğerlerine göre ise karaciğer dokusunda, CYGBc, GST1 ve NCF genlerinin florozisli grupta önemli oranda arttığı, GPx1, SOD1 ve SOD2 genlerinin ise önemli derecede azaldığı belirlendi. Böbrek dokusunda; florozili grupta CYGBc ve GPx1 artarken, SOD1, SOD2, GST1, NCF ve CCS ve NOS2 istatistiksel olarak anlamlı derecede azaldığı tespit edildi. Sonuç olarak; florozisli koyunların karaciğer ve böbrek dokularında apoptozis ve oksidatif mekanizmaların aktifleştiği ve florozis hastalığında doku hasarının moleküler temelinin anlaşılmasındabu parametrelerin önemli rolünün olduğu ortaya konulmuştur.

This thesis was planned to determine the molecular basis and causes of damage to kidney and liver which are the most affected tissues in sheep exposed to chronic fluoridethroughout apoptotic and oxidative pathways.For this purpose, liver and kidney tissues were obtained from sheep in the age range of 4-6 years diagNOSed as fluorosisclinically.The control group was consisted of clinically healthy sheep without fluorosis.Apoptotic and oxidative gene expression of target genes was determined by real qRT-PCR method.According to the 2-ΔCtresults of the apoptotic genes, it was found that the levels of caspase 3 and Bak in the liver tissue decreased (p≤0.05) and increased caspase-9 values (p≤0.05) in the fluorosis group, however, there was a significant increase in the caspase 3 values in the renal tissue group, and all genes except caspase 9 and Bak decreased statistically significantly.According to the control gene (GAPDH) was detected thatin the liver, the apoptotic genes caspase-8, caspase-9 and Bim increased, caspase-3, Bcl-2, Bak decreased, while in the kidney increased caspase-3, and Bax, caspase-8, Bcl-2, Bcl2l-1, Bim and Bak showed a decrease.According to the 2-ΔCt values of oxidative stress genes, it was determined that CYGBc, GST1 and NCF genes increased significantly in fluorosis group and GPx1, SOD1 and SOD2 genes decreased significantly.In kidney tissue; CYGBc and GPx1 increased in fluorosis group, while SOD1, SOD2, GST1, NCF and CCS and NOS2 were found to decrease significantly.As a result; It was shown that apoptosis and oxidative mechanisms are activated in liver and kidney tissues of sheep with fluorosis andthese parameters have an important role in understanding the molecular basis of tissue damage in fluorosis disease.