Rekombinasyon Sonrası Theileria Annulata Popülasyonlarında Genetik Çeşitliliğin Belirlenmesinde Kullanılacak Markerlerın Seçimi

Abstract

Amaç: Theileria annulata popülasyonlarında rekombinasyon sonrası oluşacak genetik çeşitliliğin ve rekombinasyonun yoğun olduğu kromozomalbölgelerin tespit edilmesi amacıyla kullanılacak polimorfik mini ve mikrosatellite markerlerin belirlenmesidir.Yöntemler: Markerlerin belirlenmesi amacıyla Unipro UGENE programı kullanılmıştır. T. annulata’nın rastgele karıştırılmış genomik dizilimlere göregerçek DNA diziliminde 10 kat fazla tandem tekrar (TR) belirleyen skor, eşik değer olarak belirlenmiştir. Tekrarlı motif benzerliği %96-100 arasındabulunan, minimum tekrar sayısı en az üç ve minimum tandem boyutu minisatellite bölgeler için en az üç nükleotid ve mikrosatellite bölgeler için enaz altı nükleotid olan TR’ler suffix array algoritması kullanılarak tüm genom boyunca taranmıştır.Bulgular: Tarama sonrası 359 minisatellite ve 8973 mikrosatellite bölge belirlenmiştir. TR’ler tüm genom boyunca tek tek taranarak; T. annulata’nınkromozomları üzerindeki yerleşim yerlerine, motiflerin benzerliğine (>%96), tekrar sayıları ile tek bölgeyi temsil etmesine, bölgelerin uzunluklarına(<1500 bp) ve primer tasarlanmaya uygun korunmuş bölgeler içermesine bakılarak mini ve mikrosatellite bölgeler belirlenmiştir. Belirlenen bölgeleriçoğaltmada kullanılacak primerler, korunmuş bölgelerden tasarlanmış ve her bir primer, T. annulata’nın farklı izolatları kullanılarak değerlendirilmiştir.Sonuç: Bu çalışmada, T.annulata popülasyonlarındaki çeşitliliğinin belirlenmesi amacıyla daha önce belirlenen markerlere ilave olarak kullanılabile-cek, farklı kromozomlar üzerinde bulunan toplam 13 mini ve mikrosatellite marker seçilmiştir.