Browsing by Author "Türkoğlu, Vedat"

Now showing 1 - 18 of 18

Coriandrum Sativum L. ve Chaerophyllum Macropodum Boiss. (Apiaceae)’nin İn Vitro İnsan Plazma Anjiyotensin Dönüştürücü Enzim Üzerine Etkileri
(2021) Çelikezen, Fatih Çağlar; Baş, Zehra; Türkoğlu, Vedat; Fırat, Mehmet
Hipertansiyon dünya çapında çok önemli bir problemdir. Anjiyotensin dönüştürücü enzimin (ACE, EC.3.4.15.1.) inhibisyonu, hipertansiyon tedavisinin temeli olarak kabul edilir. Ancak sentetik ACE inhibitörlerinin bazı yan etkileri vardır. Bu nedenle, doğal ACE inhibitörleri geliştirmek için birçok çalışma yapılmaktadır. Bu sebeple, bu çalışma, Apiaceae'nin iki üyesi olan Coriandrum sativum ve Chaerophyllum macropodum'un insan plazma ACE'si üzerine potansiyel inhibitör etkilerini belirlemek için tasarlanmıştır. Bu amaçla, bitkilerin su ekstraktları kullanılmıştır. ACE inhibisyon aktivitesi spektrofotometrik olarak tespit edildi. Her iki bitki özütü de ACE aktivitesi üzerinde inhibe edici etki gösterdi. Elde edilen sonuçlar, Coriandrum sativum ve Chaerophyllum macropodum'un sırasıyla 0,7 mg/mL ve 1,14 mg/mL $IC_{50}$ değeriyle insan plazma ACE üzerine inhibe edici etkilere sahip olduğunu gösterdi. İnhibisyon tipini belirlemek için Lineweaver-Burk grafiği kullanıldı. İnhibisyon türleri geri dönüşümlü, yarışmasız inhibisyon olarak bulundu. Elde edilen sonuçlara göre, Coriandrum sativum ve Chaerophyllum macropodum’un ACE inhibisyon kapasitesine sahip, kan basıncını etkin bir şekilde dengelemek için kullanılabilecek, değerli fonksiyonel gıdalardır.
The Determination of Inhibition Effect of Extracts of Thymbra Sintenisii Bornm. Et Aznav. Subsp on Angiotensin Converting Enzyme
(2020) Türkoğlu, Vedat; Baş, Zehra; Gür, Tuğba; Karahan, Fatih
Angiotensin converting enzyme (ACE, peptidyldipeptidase A, EC 3.4.15.1) has got a significant role in the arrangement of blood pressure. ACE inhibitors usually play a part in the therapies of hypertension. Hypertension is an significant cardiovascular risk factor. The main purpose of the treatment is to reduce the incidence of hypertension. In this study, the inhibition effect of butanol and water extracts of Thymbra sintenisii Bornm. et Aznav. Subsp on angiotensin converting enzyme (ACE) activity in human plasma was investigated. ACE activity was calculated at 345 nm spectrophotometrically. Extracts of Thymbra sintenisii Bornm. et Aznav. subsp plant with water and butanol were made. The effectiveness of these extracts on ACE activity was researched. Water and butanol extracts of Thymbra sintenisii indicated inhibition impact on ACE. IC50 values for water and butanol extracts of Thymbra sintenisii was measured to be 1.696 mg mL-1 and 0.395 mg mL-1 respectively. Inhibition type for water and butanol extracts of Thymbra sintenisii from Lineweaver-Burk chart was defined to be non-competitive inhibition. Synthetic ACE inhibitors are utilized in the therapy of hypertension. On the other hand, synthetic ACE inhibitors exhibit a large number of adverse effects. Therefore, ACE inhibitors have been newly researched from native herbs. These conclusions demonstrate that water and butanol extracts of Thymbra sintenisii plant may have an ACE inhibition capacity.
Inhibition Effect of Gly-Arg (Grgds) and Arg-Gly (Rgd) Bioactive Peptides on Angiotensin-Converting Enzyme Activity Purified From Human Serum
(2023) Adanaş, Resul; Türkoğlu, Vedat; Baş, Zehra
Angiotensin-converting enzyme (ACE, EC 3.4.15.1) is a physiological target for researching new antihypertensive drugs, as it is a substantial enzyme in the regulation of blood pressure. Herein, ACE was purified from human serum with affinity chromatography. Vmax and KM values were found as 60.98 (µmol/min)/mL and 0.34 mM, respectively. The effects of Gly-Arg-Gly-Asp-Ser (GRGDS) and Arg-Gly-Asp (RGD) bioactive peptides on purified ACE were researched. Also, captopril, a specific ACE inhibitory, was used as a reference inhibitor. Bioactive peptides, GRGDS and RGD, demonstrated the inhibitory effect on purified ACE with $IC_{50}$ values of 46.39 µM and 456.46 µM, respectively. Ki values and kind of inhibition for GRGDS and RGD by the Lineweaver-Burk chart were found. The kind of inhibitory for these bioactive peptides was calculated as reversible-competitive inhibitory. Ki values for GRGDS and RGD were obtained as 93.28 µM and 435.67 µM, respectively. The $IC_{50}$ value of captopril was designated as 1.57 nM. The inhibitory kind of captopril was designated as reversible non-competitive inhibitory and the Ki value was 0.99 nM. In this study, it was concluded that RGD and GRGDS bioactive peptides have the potential to be utilized as ACE inhibitors.
İnsan Plazma ve Eritrosit Ache’nin Çeşitli İlaçlarla İn Vitro İnhibisyonu
(2016) Guler, Muhammet; Başı, Zehra; Türkoğlu, Vedat; Kıvanç, Mehmet Rıza
Bu çalışmada; yapısal olarak farklı olan sekiz antibiyotik (sefazolin, kanamisin, gentamisin, klindamisin, ivermektin ve ampisilin) ve ağrı kesicinin (metamizol ve diklofenak) insan eritrosit ve plazma asetilkolinesteraz (AChE; EC 3.1.1.7) enzimi üzerine in vitro etkileri araştırılmıştır. Bu amaçla; farklı derişimlere sahip ilaçların neden olduğu inhibisyonu belirlemek için ilaçların $IC_{50}$ ve $K_I$ değerleri hesaplandı. Asetilkolinesteraz aktivitesi spektrofotometrik olarak Ellman yöntemiyle belirlendi. Daha sonra, ilaçlara maruz kalan enzim aktivitesi ölçüldü. AChE aktivitesine karşı ilaç derişimi ve Michealis-Menten grafikleri çizildi. Son olarak, bu grafikler yardımıyla $IC_{50}$ ve $K_I$ değerleri hesaplandı. IC50 değerleri, plazma AChE’sine diklofenak için $1.78 x10^{-8}$ M ve eritrosit AChE’sine gentamisin için 0.85 x10^{-8}$ M olduğu belirlendi. $K_I$ değerleri ise diklofenak için $1.36 x10^{-8}$ M ve gentamisin için $1.16 x10-8$ M olarak hesaplandı. Ayrıca, ivermektin, klindamisin, kanamisin, ampisilin için $IC_{50}$ ve $K_I$ değerleri elde edildi. Diklofenak, plazma AChE aktivitesi üzerine gentamisin de eritrosit AChE aktivitesi üzerine en yüksek inhibitör etkisi göstermiştir. Bulunan bu değerlerin daha önce yapılan benzer çalışmalardaki inhibisyon değerlerinden daha yüksek olduğu görülmektedir [1,2].
Investigation of in Vitro Effect of Alkanna Tinctoria Root Organic Phase Extracts on 6-Phosphoglukonate Dehydrogenose, Glucose-6-Phosphate Dehydrogenose and Glutathione Reductase Enzymes
(2013) Çakar, Mürsel; Türkoğlu, Vedat
Bu çalışmada Alkanna tinctoria bitki kökü organik faz ekstraktlarının insan eritrositlerinde bulunan glutatyon redüktaz, 6-fosfoglukonat dehidrogenaz ve glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enzimlerinin aktiviteleri üzerindeki etkileri araştırıldı. Enzim aktivitesi Beutler metoduna göre spektrofotometrik yöntem kullanılarak ölçüldü. Her enzim için Lineweaver-Burk grafiği çizildi. Bunun için 3 farklı substrat konsantrasyonunda 5 farklı inhibitör (organik faz bitki ekstraktı) konsantrasyonu çalışıldı. Kontrol grubu da oluşturularak grafiğe geçirildi. Bu işlem her bir enzim için ayrı ayrı uygulandı. Grafikten inhibisyon gösterenlerin inhibisyon türü ve I50 değerleri bulundu. Organik faz bitki ekstraktlarının konsantrasyon 0,0053 mg/ml-0,021 mg/ml aralığında, 6-fosfoglukonat dehidrogenaz enziminin substratı olan 6-fosfoglukonatın konsantrasyonu 0,15-0,6 mM arasında, glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enziminin substratı olan glukoz-6-fosfatın konsantrasyonu 0,36-0,72 mM arasında ve glutatyon redüktaz enziminin substratı olan okside glutatyonun konsantrasyonu 0,2-1 mM arasında seçilmiştir. Bu konsantrasyonlar en uygun olacak şekilde ön ölçüm işlemleri ile belirlenmiştir. Alkanna tinctoria bitki kökünün organiz faz ekstraktı, 6-fosfoglukonat dehidrogenaz ve glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enzimlerini aktive ederken glutatyon redüktaz enzimini inhibe etti. Bitki ekstraktları glutatyon redüktaz enziminin aktivitesi üzerine yarışmasız inhibisyon etkisi gösterdi ve inhibisyonun I50 değeri 0,0249 mg/ml olarak hesaplandı.
Investigation of in Vitro Effects of Nadh and Fad Compounds on the Activity of Angiotensin Converting Enzyme (ace, E.c.3.4.15.1) Purified From Sheep Kidney by Affinity Chromatography Method
(2019) Kıylık, Ayşenur; Türkoğlu, Vedat
Anjiotensin konverting enzim (ACE EC 3.4.15.1), vazokonstriktör anjiotensin II'yi üreterek kan basıncının düzenlenmesinde merkezi bir rol oynar. Bu çalışmada ACE, koyun böbreğinden afinite kromatografisi yöntemi ile tek basamakta saflaştırıldı ve enzimin saflaştırma oranı 10305 kat ve spesifik aktivite 19075 EU/mg protein olarak hesaplandı. SDS-PAGE ile ACE'in 60 kDa ve 70 kDa molekül ağırlığında iki alt birime sahip olduğu belirlendi. Koyun böbreğinden saflaştırılan ACE aktivitesi üzerine NADH ve FAD bileşiklerinin etkisi araştırıldı. FAD bileşiği ACE aktivitesi üzerine hiçbir etki göstermedi. NADH bileşiği ise inhibisyon etkisi gösterdi. NADH bileşiği için % Aktiviteye karşı İnhibitör konsantrasyonu grafiği çizildi. Bu grafiğin denkleminden IC50 değeri 244.33 µM olarak hesaplandı. İnhibisyon çeşidi ve Ki değerini belirlemek için Lineveawer-Burk grafiği çizildi. İnhibisyon çeşidi yarışmasız inhibisyon ve Ki değeri 175.08 µM olarak belirlendi.
Investigation of the Effect of Some Antioxidant Compounds on Glutathione Reductase (ec 1.8.1.7) Enzyme
(2019) Çiftci, Eser; Türkoğlu, Vedat
Glutatyon redüktaz (GR, EC 1.8.1.7) okside glutatyonu (GSSG) redükte glutatyona (GSH) katalizleyen spesifik antioksidan bir enzimdir. GR enzimi, hücresel indirgenmiş GSH seviyesini koruyarak reaktif oksijen türlerine karşı hücre savunmasında merkezi bir rol oynar. Glutatyon redüktaz enzimi (GR, EC 1.8.1.7), insan eritrositinden afinite kromatografisi yöntemi ile tek basamakta saflaştırıldı ve GR enziminin saflaştırma katsayısı 6224 kat ve spesifik aktivite 9.586 EU/mg protein olarak hesaplandı. SDS-PAGE ile GR enziminin molekül ağırlığı 53 kDa olarak belirlendi. İnsan eritrositinden saflaştırılan GR aktivitesi üzerine timokinon ve likopen bileşiklerinin etkisi araştırıldı. Her iki bileşik GR aktivitesi üzerine inhibisyon etkisi gösterdi. Timokinon ve likopen için % Aktiviteye karşı İnhibitör konsantrasyonu grafiği çizildi. Bu grafiğin denkleminden timokinon ve likopen için IC50 değerleri sırasıyla 62.12 µM ve 35.79 µM olarak hesaplandı. Lineveawer-Burk grafiğinden İnhibisyon çeşidi ve Ki değerleri bulundu. Timokinon ve likopen için inhibisyon çeşidi yarışmasız inhibisyon olarak belirlendi. Timokinon için Ki değeri 57.71 µM ve likopen için Ki değeri 46.65 µM olarak hesaplandı. Anahtar kelimeler: Antioksidan, Glutatyon redüktaz (GR), İnhibisyon, Likopen, Saflaştırma, Timokinon.
Investigation of the Effect of Some Bioactive Peptides on the Activity of Angiotensin Converting Enzyme (ace, E.c.3.4.15.1) Purified From Human Serum
(2023) Adanaş, Resul; Türkoğlu, Vedat
Biyoaktif peptidler, hipertansiyon tedavisinde kullanılan sentetik anjiotensin konverting enzim (ACE) inhibitörlerine doğal ve önemli bir alternatiftir. Bu çalışmada ACE, afinite kromatografisi işlemi ile insan serumundan tek adımda 3575 kat saflaştırıldı. ACE enziminin molekül ağırlığı SDS-PAGE yöntemi ile 60 kDa ve 70 kDa olmak üzere iki alt birim olarak belirlendi. Lineweaver-Burk grafiğinden Vmax ve KM değerleri sırasıyla 96.15 (μmol/dk).mL-1 ve 0.2 mM olarak hesaplandı. Gly-Pro (GP), Arg-Gly-Asp-Ser (RGDS) ve Ser-Asp-Gly-Arg-Gly (SDGRG) biyoaktif peptidlerinin saflaştırılan ACE aktivitesi üzerine etkisi araştırıldı. Ayrıca spesifik bir ACE inhibitörü olan lisinopril bileşiğinin inhibisyon etkisi belirlendi. İnsan serumundan saflaştırılan ACE aktivitesi üzerine GP, RGDS ve SDGRG önemli ölçüde inhibitör etkisi gösterdi. Bu peptidler için IC50 değerleri sırasıyla 184.71 μM, 107.16 μM ve 32.54 μM olarak bulundu. Lineweaver-Burk grafikleri ile GP, RGDS ve SDGRG için Ki değerleri ve inhibitör türü bulundu. Bu peptidler için inhibitör türü, dönüşümlü-yarışmalı inhibitör olarak belirlendi. Ki değerleri GP, RGDS ve SDGRG için sırasıyla 260.02 μM, 63.44 μM ve 11.42 μM olarak hesaplandı. Lisinoprilin IC50 değeri 0.35 nM olarak bulundu. Lisinoprilin inhibisyon tipi, dönüşümlü-yarışmasız inhibitör ve Ki değeri 0.15 nM olarak belirlendi. Bu çalışmada GP, RGDS ve SDGRG peptidlerinin ACE aktivitesi üzerine inhibitör etkisi göstermesi ile bu peptidlerin hipertansiyon tedavisinde alternatif olabileceği sonucuna varıldı
Investigation of the Effect of Some Water-Soluble Vitamins on the Activity of Angiotensin Converting Enzyme Purified From Sheep Plasma
(2023) Çiftçi, Muhammed Haluk; Türkoğlu, Vedat
Anjiotensin konverting (dönüştürücü) enzim (ACE, EC 3.4.15.1) kan basıncının düzenlenmesinde çok önemli bir faktördür. Bu çalışmada ACE, koyun plazmasından afinite kromatografisi metodu ile tek adımda saflaştırıldı. ACE enziminin spesifik aktivitesi 4879 EU/mg protein ve saflaştırma katsayısı 8636 kat olarak hesaplandı. SDS-PAGE yöntemi kullanılarak ACE enziminin molekül ağırlığı 60 kDa ve 70 kDa olmak üzere iki alt birim olarak bulundu. Koyun plazmasından saflaştırılan ACE için optimum pH aralığı 6.4-6.8 ve optimum sıcaklık 40 oC olarak belirlendi. KM ve Vmax değerleri sırasıyla 0.49 mM ve 101.01 (µmol/dk).mL-1 olarak hesaplandı. Koyun plazmasından saflaştırılan ACE aktivitesi üzerine tiamin (B1 vitamini) ve riboflavin (B2 vitamini) bileşiklerinin etkisi araştırıldı. Tiamin ve riboflavin ACE aktivitesi üzerine önemli ölçüde inhibisyon etkisi gösterdi. Ayrıca spesifik bir ACE inhibitörü olan kaptopril bileşiğinin inhibisyon etkisi belirlendi. Grafiklerin denklemleri kullanılarak IC50 değerleri sırasıyla 1142.09 µM, 12.11 µM ve 1.60 nM olarak bulundu. Bu bileşiklerin Ki değerlerini ve inhibisyon türlerini belirlemek için Lineveawer-Burk grafikleri çizildi. Tiamin ve riboflavin bileşiklerinin inhibisyon türü için dönüşümlü-yarışmasız inhibisyon olarak bulundu. Kaptopril için inhibisyon tipi dönüşümlü-yarışmalı inhibisyon olarak belirlendi. Tiamin, riboflavin ve kaptopril için Ki değerleri sırasıyla 1352.04 µM, 12.30 µM ve 1.06 nM olarak belirlendi. Bu çalışmada tiamin ve riboflavin vitaminlerinin ACE inhibitörü potansiyeline sahip olduğu sonucuna varıldı.
Investigation of the in Vitro Effect of Some Active Substance That Prevent Hypertension on Angiotensin Converting Enzyme (ace Ec 3.4.15.1) Purified From Bovine Lung by Affinity Chromatography Method
(2019) Karahan, Fatih; Türkoğlu, Vedat
Endotel hücreleri tarafından sentez edilen ve kan basıncının düzenlenmesinden sorumlu olan anjiotensin konverting enzim (ACE EC 3.4.15.1), sığır akciğerinden afinite kromatografisi yöntemi ile saflaştırıldı ve sığır akciğeri anjiotensin konverting enziminin saflaştırma oranı 1748 kat olarak hesaplandı. Saflaştırılan ACE için optimum sıcaklık ve pH sırasıyla 35-40 oC ve 7.6 olarak bulundu. SDS-PAGE ile ACE'in 57 kDa, 66 kDa ve 190 kDa molekül ağırlığında üç alt birime sahip olduğu görüldü. Daha sonra jel filtrasyon kromatografisi yöntemi ile enzimin molekül ağırlığı belirlendi ve ACE'in molekül ağırlığı 303 kDa olarak hesaplandı. ACE inhibitörleri lisinopril, kaptopril, fosinopril, beta blokerer atenolol, propranolol, diüretikler triamteren, spironolakton ve indapamidin ACE aktivitesi üzerine etkileri araştırıldı. Ancak spironolakton ve indapamid saf su içinde çözünmediğinden dolayı çalışılamadı. ACE inhibitörleri lisinopril, kaptopril, fosinopril ve diüretik olan triamteren, ACE aktivitesi üzerinde inhibisyon etkisi gösterirken beta blokerleri herhangi bir etki göstermedi. Lisinopril, kaptopril, fosinopril ve triamterenin gibi etken maddeler ACE aktivitesi üzerine yarışmasız inhibisyon gösterdi ve grafikleri çizildi. Grafik denkleminden bu bileşiklerin IC50 değerleri hesaplandı. Sığır akciğeri ACE aktivitesi üzerine inhibisyon etkisi gösteren bu etken maddelerin IC50 değerleri, sırasıyla 4.085 nM, 0.835 nM, 1.159 µM ve 227 µM olarak hesaplandı. Aynı zamanda lisinopril, kaptopril, fosinopril ve triamteren için Ki sabitleri, sırasıyla 6.449 nM, 1.057 nM, 1.675 µM ve 419.5 µM olarak hesaplandı. Kaptopril, 0.835 nM IC50 değeri ile en yüksek inhibitör aktivitesini gösterdi.
Purification and Characterization of Angiotensin Converting Enzyme ((ace, E.c. 3.4.15.1) From Sheep Lung by Afinity Chromatography Method
(2021) Aydın, Fatih; Türkoğlu, Vedat
Anjiotensin konverting enzim (ACE; EC 3.4.15.1), renin-anjiotensin sisteminin düzenlenmesiyle kan basıncının korunmasına yardımcı olan bir dipeptidil karboksipeptidaz enzimidir. ACE, inaktif dekapeptid anjiotensin I'i, etkili bir vazokonstriktör olan aktif bir oktapeptit anjiotensin II'ye dönüştürür ve böylece kan basıncını düzenler. Aynı zamanda bu enzim; kinin-kallikrein sistemindeki vazodilatör bradikininini inaktive eder. Hipertansiyon; inme, koroner kalp hastalığı, ateroskleroz ve kalp yetmezliği gibi kardiyovasküler hastalıklar için en önemli risk faktörlerinden biridir. Bu nedenle son yıllarda ACE enzimine ilgi artmış ve bu enzimle ilgili çalışmalar çoğalmıştır. Hipertansiyon ACE enziminin inhibisyonu ile tedavi edilebilir. Enzim inhibisyonu çalışabilmek için saf enzim ile çalışmak çok daha doğru sonuçlar verir. Bu çalışmada ACE, koyun akciğerinden homojenizasyon ve santrifüj basamaklarından sonra afinite kromatografisi yöntemi ile tek basamakta saflaştırılmıştır ve karakterize edilmiştir. Enzimin saflaştırma oranı 6405 kat ve spesifik aktivite 16871 EU/mg protein olarak hesaplanmıştır. ACE enziminin saflığı ve molekül ağırlığı SDS-PAGE ile belirlenmiştir. SDS-PAGE ile ACE enziminin 60 kDa ve 70 kDa molekül ağırlığında iki alt birime sahip olduğu bulunmuştur. Saflaştırılan ACE enziminin optimum sıcaklık ve optimum pH değerleri belirlenmiştir. Saf ACE için optimum sıcaklık ve optimum pH değerleri sırasıyla 40 oC ve 7.4'dür.
Purification and Characterization of Glutathione Reductase From Van Lake Fish (Chalcalburnus Tarichi, P-1811) and Investigation of Effects of Some Drugs and Chemicals on This Enzyme
(2010) Altun, Muhammed; Türkoğlu, Vedat
Glutatyon redüktaz, (Glutatyon: NADP+ oksidoredüktaz, EC 1.8.1.7, GR) enzimi, Van Gölü balığının (Chalcalburnus tarichi, P-1811) karaciğerinden ve eritrositlerinden saflaştırıldı. Saflaştırma homojenat ve hemolizat hazırlanmasının ardından afinite kromatografisi yöntemiyle yapıldı. Karaciğer ve eritrosit GR enzimlerinin saflaştırılması sırasıyla 4552 ve 7619 kat olarak gerçekleştirildi. Karaciğer ve eritrosit GR enzimleri için optimum sıcaklık, pH ve iyonik şiddet etkisi araştırıldı. Bu değerler karaciğer ve eritrosit GR için sırasıyla 40 ve 60 °C; 8.0, 8.0 ve 50 mM, 50 mM olarak bulundu. SDS-PAGE ile enzimlerin alt birimlerinin molekül ağırlıkları 55 kDa olarak hesaplandı. Ayrıca Van Gölü balığı karaciğer ve eritrosit GR enzim aktiviteleri için amikasin, sefazolin, ivermektin ve kanamisin ilaçlarının etkileri incelendi. Yarışmasız inhibisyon etkisi gösteren bu ilaçlar için Ki sabitleri ve I50 değerleri hesaplandı. Van Gölü Balığı karaciğer GR enzimi için I50 değerleri sırayla 1.63x10-2, 3.66x10-2, 5.04x10-4, 1.88x10-2 M ve eritrosit GR enzimi için I50 değerleri sırayla 2x10-2, 3.04x10-2, 7.87x10-4, 3.18x10-2 M olarak hesaplandı. Ki sabitleri de balık karaciğer GR enzimi için sırayla 1.39x10-2 M, 1.84x10-2 M, 6.54x10-4 M, 1.12x10-2 M; eritrosit GR enzimi için de sırayla 2.32 x10-2 M, 4.64 x10-2 M, 1.19 x10-3 M, 3.64 x10-2 M olarak hesaplandı.
Purification and Characterization of Van Lake Fish (Chalcalburnus Tarichii P.1811) Liver and Brain Acethylcholinesterase
(2009) Akman, Esrin; Türkoğlu, Vedat; Celik, Ismail
In this study, acethylcholinesterase was purified from liver and brain of Van Lake fish (Chalcalburnus Tarichii P.1811) by using affinity chromatography technique. The purification folds were determined as 142 and 344 for brain and liver, respectively. The purity of enzyme was controlled with sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDSPAGE). The optimal pH was determined as 7.5-8.5 for brain and liver, respectively. On the other hand, the optimal temperature was determined as 35oC for both liver and brain. Also, the highest activities were observed in concentration of 0.2 M (NH4)2SO4 as ionic strength for both liver and brain.
Purification, Characterization of 6-Phosphogluconate Dehydrogenase (ec 1.1.1.44; 6pgd) From Lake Van Fish Liver by Affinity Chromatography
(2010) Güler, Muhammet; Türkoğlu, Vedat
Bu çalışmada Van Gölü balığı karaciğeri 6-fosfoglukonat dehidrogenaz (EC 1.1.1.44; 6PGD) enzimi afinite kromatografisi metoduyla saflaştırıldı. Bu çalışmada önce balık karaciğeri uygun bir şekilde alınarak homojenat hazırlandı. Hazırlanan homojenat dengeleme tamponu ile dengelenen afinite kolonuna tatbik edildi. Kolon, absorbans değeri 0,01 nm'den küçük olana kadar yıkama tamponu ile yıkandı. Son olarak kolona elüsyon tamponu tatbik edilerek ayrılan enzim fraksiyonları elüsyonlar halinde alındı. Her bir elüsyonun 280 nm'de kalitatif protein tayinleri, 595 nm'de kantitatif protein tayinleri ve 340 nm'de aktivite tayinleri yapıldı. Enzimin saflığını kontrol etmek için Sodyumdodesilsülfat poliakrilamid jel elektroforez (SDS-PAGE) metodu kullanıldı. Elektroforez jelinin fotoğrafı çekildi ve tek protein bandı görüldü. Saflaştırma oranı 446.5-kat olarak hesaplandı. SDS-PAGE ile enzimin alt biriminin molekül ağırlığı 57 kDa olarak belirlendi. Enzimin optimum sıcaklığı ve optimum pH'si sırasıyla 35-40 OC, 8-9 aralığında bulundu. İyonik şiddet etkisinin araştırıldığı bu çalışmada enzimin maksimum aktivite gösterdiği tuz [(NH4)2SO4] konsantrasyonu 0.02 M olarak bulundu.
The Investigation of in Vitro Effects of Some Antibiotic and Painkiller Drugs on the Asetylcholinesterase (Ache, Ec.3.1.1.7) Enzyme in Hemozylate of Human Eritrocite and Plazma
(2010) Kıvanç, Mehmet Rıza; Türkoğlu, Vedat
Bu çalışmanın amacı; insan plazma ve eritrosit asetilkolinesteraz enzimi üzerine bazı antibiyotik ve ağrı kesicilerin in vitro etkisini araştırmaktır. Bu çalışmada 8 ilaçın insan eritrosit ve plazma asetilkolinesteraz enziminin aktivitesi üzerine etkileri araştırıldı. Kullanılan ilaçlar; İveral, Voltaren, Clin, Genta, Ampisina, Cefamezin, Andolor ve Kanovet'dir. Bu ilaçlardan insan plazma AChE inhibe edenler; İveral, Voltaren, Clin, Genta, Ampisina'dır. Bu ilaçlara ait Lineweaver-Burk grafiklerinden Kİ değerleri hesaplandı ve Kİ değerleri sırayla 1,475 10-8 M, 1,364 10-8 M, 0,804 10-5 M, 2,156 10-8 M,1,558 10-8 M olarak bulundu. Yine bu ilaçların 3 farklı konsantrasyonuna karşı % aktivite grafiğinden I50 değerleri hesaplandı ve I50 değerleri sırayla 1,89 10-8 M, 1,78 10-8 M, 0,5 10-6 M, 3,6 10-8 M, 1,4 10-6 M olarak bulundu. İnsan plazma AChE aktive edenler; Cefamezin, Kanovit ve Andolor'dur. İnsan eritrosit AChE inhibe edenler; İveral, Voltaren, Clin, Genta ve Kanovit'dir. Bu ilaçlara ait Lineweaver-Burk grafiklerinden Kİ değerleri hesaplandı ve Kİ değerleri şöyledir; 1,61310-8 M, 0,99 10-8 M, 3,74 10-8 M, 1,16 10-8 M, 0,87 10-8 M'dır. Yine bu ilaçların 3 farklı konsantrasyonuna karşı % aktivite grafiğinden I50 değerleri hesaplandı ve I50 değerleri; 1,78 10-8 M, 1,39 10-8 M, 3,31 10-8 M, 8,50 10-9 M ve 1,65 10-8 M olarak bulundu. İnsan eritrosit AChE aktive edenler; Ampsina, Cefamezin ve Andolor'dur.
The Research of in Vitro Effects of Certain Plant Extracts on Acetylcholinesterase (ec 3.1.1.7) Enzyme in Homogenate of the Liver and Brain of Lake Van Fish
(2009) Başı, Zehra; Türkoğlu, Vedat
Bu çalışmada; sinir uyarılarının naklinde görevli enzim olan asetilkolinesteraz (EC.3.1.1.7) üzerine seçtiğimiz üç bitkinin suda çözünebilir ekstraktının etkisi araştırıldı. Çalışmamızda enzim kaynağı olarak Van Gölü balığı (Chalcalburnus tarichi P.1811) karaciğer ve beyin homojenatı, bitki olarak meyan [Glycyrrhiza glabra L. (Leguminosae)], anason [Pimpinella anisum L. (Umbelliferae)] ve papatya [Matricaria chamomilla L. (Compositae)]'den hazırlanan ekstrakt seçildi. Uygun tampon ortamına alınan homojenat ve bitki ekstratları çalışmada bu şekli ile kullanıldı. Çalışmada bitkilerin her birinin ekstraktı, bu enzim üzerine modülatör etkisi araştırılmış ve bu bitkilerin üçününde hem beyin AChE'si ve hemde karaciğer AChE'si üzerine inhibitör mü yoksa aktivatör mü etkisi yaptığı araştırıldı. İnhibitör etkili olanların nasıl bir inhibitör olduğu bulundu, aktivatör etkisi gösterenlerinde % aktivite değerleri hesaplandı. Balık beynindeki asetilkolinesteraz enzimi üzerine bu üç bitki uygulanarak bunların inhibisyon kinetikleri incelenerek sonuçta I50 değerleri bulundu. % Aktivite-I grafikleri çizilerek, çizilen bu grafiklerden her bir bitkinin I50 değerleri hesaplandı. I50 değerleri sırasıyla; 1,714 mg/ml, 0,394 mg/ml ve 0,604 mg/ml olarak bulundu. Kinetik çalışmanın bu aşamasında her bir bitki için 5 farklı substrat ve 3 farklı inhibitör konsantrasyonunda çalışıldı. Sonuçlar Lineweaver-Burk grafiğine dönüştürüldü. Grafikten inhibisyon çeşidi anlaşıldı. İnhibisyon etkisi gösteren 3 bitkide yarışmasız inhibisyon gösterdi. Balık karaciğerinde ise bu üç bitkinin aktivasyon etkisi gösterdiği bulundu. Aynı zamanda ham homojenat enziminin optimum sıcaklık, optimum pH'sıda incelendi. Bu işlem beyin ve karaciğer homojenatı için ayrı ayrı tekrarlandı. Enzimin optimum sıcaklığı 30oC ve optimum pH'sı karaciğer için 6-8, beyin için ise 6-8,5 olarak bulundu. Spesifik aktivite beyin için 130,5 EU/mg ve karaciğer için 13,59 EU/mg olarak bulundu.
The Research of in Vitro Effects of Some Plant Extracts on Acetylcholinesterase (ec 3.1.1.7) Enzyme in the Erythrocyte and Serum of Human
(2010) Özdemir, Alaattin; Türkoğlu, Vedat
Bu çalışmada; asetilkolinesteraz (EC 3.1.1.7) üzerine seçtiğimiz beş bitkinin suda çözünebilir ekstraktının etkisi araştırıldı. Çalışmamızda enzim kaynağı insan serum ve eritrositi, bitki olarak Yabani kekik (Ziziphora clinopodioides Lam.), Hapşırık otu (Chrysopthalmum montanum (DC.) Boiss, , Melisa (Melissa officinalis L. (Labiatae) Sinirlilik otu (Plantago (Plantaginaceae)) ve Kedi otu kökü (Plantago (Plantaginaceae))'den hazırlanan ekstrakt seçildi. Eritrosit için % Aktivite-I grafikleri çizilerek, çizilen bu grafiklerden her bir bitkinin I50 değerleri hesaplandı. İnhibisyon etkisi gösterenlerin I50 değerleri; Yabani kekik için 0.514 mg.mL-1 , Hapşırık otu için 1.074 mg.mL-1, Melisa için 8.462 mg.mL-1 , ve Kedi otu kökü için 7.814 mg.mL-1 olarak bulundu. Serum AChE üzerine Melisa bitkisi inhibisyon etkisi gösterirken, Kediotu kökü aktivasyon etkisi gösterdi. İnhibisyon etkisi gösteren Melisa için I50 değeri 7.425 mg.mL-1 olarak bulundu. Kinetik çalışmanın bu aşamasında her bir bitki için 5 farklı substrat ve 3 farklı inhibitör konsantrasyonunda çalışıldı. Eritrositte İnhibisyon etkisi gösteren Yabani kekik ve Hapşırık otu yarışmalı inhibisyon gösterirken, Melisa ve Kedi otu kökü yarışmasız inhibisyon gösterdi. Serumda ise Melisa yarışmasız inhibisyon gösterdi. Serum için enzimin optimum sıcaklığı 30oC ve optimum pH'ı ise 8.5-9, eritrosit için ise optimum sıcaklık 35 oC, optimum pH'ı ise 8-8.5 olarak bulundu. Spesifik aktivite serum için 2.398 EU.mg-1 ve eritrosit için 3.695 EU.mg-1 olarak bulundu.
Van Gölü Balığı Beyin ve Karaciğerindeki Asetilkolinesteraz (EC 3.1.1.7) Enzimi Üzerine Bazı Bitki Özütlerinin İn Vitro Etkileri
(2016) Türkoğlu, Vedat; Kıvanç, M. Rıza; Guler, Muhammet; Başı, Zehra
Bu çalışmada; sinir uyarılarının naklinden görevli enzim olan Van Gölü balığı (Chalcalburnus tarichi P.1811) karaciğer ve beyin asetilkolinesteraz (EC 3.1.1.7) enzimi üzerine meyan [Glycyrrhiza glabra L. (Leguminosae)], anason [Pimpinella anisum L. (Umbelliferae)] ve papatya [Matricaria chamomilla L. (Compositae)] özütlerinin etkisi araştırılmıştır. Bu özütler balık karaciğer AChE’ni active ederken balık beyin AChE’ni inhibe etmiştir. Kullanılan bitkiler balık beyni AChE üzerine yarışmasız inhibisyon göstermiştir. $I{_50}$ değerleri meyan için 1,714 $mg.mL^{-1}$, anason için 0,394 $mg.mL^{-1}$ ve papatya için 0,604 mg.ml-1 olarak bulunmuştur. Karaciğer ve beyin AcHE için optimum sıcaklık 30oC ve optimum pH sırasıyla 6-8 ve 6-8,5 olarak bulunmuştur. Ek olarak balık beyin ve karaciğer AChE’nin spesifik aktiviteleri sırasıyla 130,5 EU.mg-1 ve 13,59 EU.mg-1 olarak bulunmuştur.