Iğdır Yöresindeki Sığırlarda Theileria Spp.'nin Nested-PCR Yöntemi ile Moleküler Karakterizasyonu

Abstract

Bu çalışma, Türkiye'nin doğusunda yer alan Iğdır ilindeki sığırlarda Theileria spp. ve Theileria annulata enfeksiyonlarının prevalansını belirlemek amacıyla gerçekleştirilmiştir. Klinik olarak muayene edilen toplam 100 sığırdan kan örnekleri toplanmıştır. Hayvanların 39'unda yüksek ateş, lenfadenopati, burun ve göz akıntısı, zayıf vücut kondisyonu, anemi ve kenelerin varlığı gibi Theileria spp. enfeksiyonunu düşündüren klinik belirtiler gözlemlenmiştir. Giemsa ile boyanan kan yaymalarının mikroskobik incelemesinde, hayvanların %22'sinde eritrosit içi piroplazm formları tespit edilmiştir. Theileria spp.'ye özgü 989a/990a primerleri kullanılarak yapılan konvansiyonel PCR analizinde, 39 örnekte 1098 bp'lik özgül bantlar elde edilmiştir. Bu örneklere uygulanan Nested PCR sonucunda ise, N516/N517 primerleri ile 39 klinik pozitif örneğin %30,76'sında T. annulata pozitifliği saptanmış ve 721 bp büyüklüğünde spesifik amplikonlar elde edilmiştir. Elde edilen bulgular, çalışma alanında T. annulata enfeksiyonunun önemli düzeyde var olduğunu göstermektedir. Pozitif bulunan iki izolatın DNA dizileri sekanslanarak BLAST analizi yapılmış ve ardından Tams1 gen bölgesine dayalı filogenetik analiz gerçekleştirilmiştir. Iğdır ilinden elde edilen izolatların, İran ve Pakistan kökenli suşlarla aynı klad içerisinde yer aldığı ve yüksek düzeyde genetik benzerlik gösterdiği belirlenmiştir. Bu durum, bölgede dolaşımda olan T. annulata suşlarının dış kaynaklı izolatlarla evrimsel olarak yakın ilişkili olduğunu ve lokal varyasyonun sınırlı olduğunu göstermektedir. Önemli olarak, bu çalışma Iğdır ilinden elde edilen Theileria annulata izolatlarının moleküler ve filogenetik olarak karakterize edildiği ilk çalışmadır.This study was conducted to determine the prevalence of Theileria spp. and Theileria annulata infections in cattle from Iğdır Province, located in eastern Turkey. Blood samples were collected from a total of 100 clinically examined cattle. Clinical signs suggestive of Theileria spp. infection, such as high fever, lymphadenopathy, nasal and ocular discharge, poor body condition, anemia, and the presence of ticks, were observed in 39 of the animals. Microscopic examination of Giemsa-stained blood smears revealed intraerythrocytic piroplasm forms in 22% of the cattle. In conventional PCR analysis using Theileria spp. specific primers (989a/990a), specific 1098 bp amplicons were obtained in 39 samples. Subsequent nested PCR using N516/N517 primers confirmed T. annulata positivity in 30.76% of the clinically suspected samples, producing specific bands of approximately 721 bp. These findings indicate a significant presence of T. annulata infection in the study area. DNA sequencing and BLAST analysis were performed on two positive isolates. Phylogenetic analysis based on the Tams1 gene region showed that the isolates obtained from Iğdır clustered within the same clade as isolates from Iran and Pakistan, displaying a high degree of genetic similarity. This suggests that the circulating T. annulata strains in the region are evolutionarily closely related to foreign isolates, with limited local variation. Importantly, this study represents the first molecular and phylogenetic characterization of Theileria annulata isolates from cattle in the Iğdır Province.