Sığır Kappa-kazeinin A ve B Genetik Varyantlarının Pcr-rflp Analizi için Yeni Bir Primer Dizaynı

Abstract

İnek sütü yaklaşık %3,4 oranında yüksek kaliteli protein içerir ve insan beslenmesi için oldukça elzemdir. Kappa (κ) kazein, süt proteinlerinden birisidir ve CSN3 geni tarafından kodlanmaktadır. Çalışmalar κ-kazeinin sütün özellikleri ve işlenmesi üzerine önemli bir etkiye sahip olduğunu göstermektedir. κ-kazein sütün kesilmesi sürecinde stabilize edici bir faktör olarak rol almaktadır; bu durum, κ-kazeini peynir fabrikalarında istenilir hale getirmektedir. Kappa (κ) kazeinin A ve B genetik varyantları iyi bilinmekte ve yoğun çalışılmaktadır. Sığırların genotiplenmesi için PCR-RFLP yöntemi kullanılmaktadır. Bu amaçla, farklı primer çiftleri CSN3 geninin polimorfik bölgesini çoğaltmak için kullanılmaktadır. Önceki bir çalışmada, polimorfik bölgenin HinfI enzimi ile kesimi kısa ve benzer uzunlukta fragmentler oluşturdu. Agaroz jel elektroforezinde çok benzer DNA fragmentlerinin ayrımı neredeyse imkansızdır ve kısa DNA fragmentlerin yorumlanması bazen zorluklara sebep olmaktadır. Bu sebeple, bu çalışmada yeni bir primerin dizaynı tanımlandı. Yeni primerin kullanılamasıyla daha uzun DNA fragmenti başarılı bir şekilde çoğaltıldı ve bu PCR ürünlerinin HinfI kesimi, agaroz jel elektroforezinde kolaylıkla ayrılabilen ve yorumlanabilen çok farklı uzunlukta DNA fragmentlerinin oluşmasını sağladı. Bu çalışmada tanımlanan primer, allel frenkans araştırmaları ve yetiştirme stratejileri ile ilgili gelecek çalışmalarda kullanılabilir.